Опубликовать статью

Информационное партнерство

Инфоресурсы

Контакты

«

ТОМ 12, СТ. 89 (стр. 1101-1118)    |    15 октября 2011 г.

»

Фундаментальные исследования » Биофизика

Новый метод получения высокоочищенного белка p32 бактериофага т4 для биомедицинских исследований

Н.В. Зырина, Л.А.Железная, И.В. Свадьбина, Н.И. Матвиенко*

Учреждение Российской академии наук Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, 142290 г. Пущино Московской обл., ул. Институтская, 3, тел. (495) 632-78-69. E-mail: office@iteb.ru

*- Учреждение Российской академии наук Институт белка РАН, 142290, г. Пущино Московской обл. Институтская, 4,

В настоящее время для биомедицинских исследований широко используются различные методы амплификации нуклеиновых кислот. Однако при амплификации ДНК часто возникает проблема появления неспецифических продуктов. Применение в реакциях амплификации ДНК белков, связывающихся с оцДНК (белков SSB - single-stranded DNA binding) бактериофага T4 и E.coli, часто приводит к решению этой проблемы. В связи с этим актуальной является задача получения высокоочищенных препаратов SSB белков, свободных от примесей ДНК и нуклеаз. Мы разработали новый метод получения высокоочищенного белка SSB (T4gp32) из сконструированного нами штамма-суперпродуцента. Особенностью разработанного нами метода выделения белка T4gp32 является обработка клеточного лизата спермином для освобождения препарата от примесей нуклеиновых кислот и применение на последующих этапах очистки белка хроматографией на гепарин-сефарозе, что позволило получить препарат с чистотой более 99% свободный от экзо-и эндонуклеазных активностей.

A new metod for preparation of highly purified the bacteriophage t4 gene 32 protein for biomedical research

N.V. Zyrina, L.A. Zheleznaya, I.V. Svadbina, N.I. Matvienko*

Russian Academy of Sciences Institute of Theoretical and Experimental Biophysics

*- Russian Academy of Sciences Institute of Protein Sciences

Many recent advances in biomedical research can be attributed to a variety of DNA amplification methods. However the most significant problem is the appearance of nonspecifically amplified products. Employing single-stranded DNA binding (SSB) proteins from E.coli and bacteriophage T4 for DNA amplification often eliminates this problem. Thereby techniques for DNA amplification in biomedical research require the use of highly purified preparations of SSB proteins, free of DNA and nucleases. We suggest a new method for preparation of highly purified recombinant bacteriophage T4 gene 32 protein (T4gp32). Removal of nucleic acids was obtained by treatment cell lysate with spermine. Subsequent purification T4gp32 by chromatography on heparin-sepharose column allowed obtaining nuclease-free preparation better than 99% homogeneity.